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A obtenção de oócitos disponíveis para produção in vitro de embriões ocorre através da técnica de aspiração folicular transvaginal, ou OPU (ovum pick up). Considerando que a técnica causa leves lesões no fundo de saco vaginal e nos ovários, objetivou-se avaliar se o número de aspirações afeta a população folicular antral ovariana (PFAO) e a taxa de viabilidade oocitária de vacas Girolando submetidas à essa técnica. Para tanto, 12 fêmeas bovinas da raça Girolando (3/4 Holandês x ¼ Gir) cíclicas, não gestantes, não lactantes, com idade média de 5,16±1,97 anos, peso médio de 558,41±67,6 kg e escore de condição corporal (ECC) médio de 4,06±0,41 (escala 1-5) foram utilizadas no experimento. Um total de 9 sessões de OPU foram realizadas com intervalos médios de 21 dias e, em cada sessão, todos os folículos de 3 a 8 mm visualizados em ambos ovários foram contados para determinação da população folicular antral (PFAO) e, posteriormente, puncionados para obtenção dos complexos oócito-cumulus (COCs). Para tal, foi utilizada agulha de calibre 20G acoplada a transdutor microconvexo, com bomba de sucção a vácuo, 80 mmHg. Após a aspiração dos folículos, o material coletado foi identificado e, então, conduzido ao laboratório e avaliado sob esteremicroscópico, sendo considerados viáveis os oócitos de graus I e II. O delineamento foi inteiramente casualizado e os dados de PFAO e viabilidade oocitária testados quanto a sua normalidade e transformados quando necessários. Em seguida, foram submetidos à análise de variância seguido de Scott-Knott ao nível de 5% de probabilidade, realizados pelo software ASSISTAT v.7.7, e estão apresentados como médias±DP. Observou-se que há grande variação entre animais e alta repetibilidade individual no número de folículos; no entanto, não foi observada diferença (P>0,05) da PFAO entre as OPUs (24,83±8,12; 31,5±10,91; 27,83±8,14; 28,83±10,9; 29,66±7,19; 29,08±9,58; 24,83±12,16; 21,00±9,38 e 21,417,82± folículos respectivamente). Também não houve diferença (P>0,05) na viabilidade oocitária entre as sucessivas OPUs (71,18±14,25%; 75,55±20,56%; 60,24±24,6%; 67,01±29,9%; 43,80±25,2%; 54,7±29%; 64,6±24,7%; 69,86±15,48% e 49,88±24,19% respectivamente). Com base nesses dados, pode-se concluir que vacas Girolando submetidas a até 9 sessões de OPU com intervalo de 21 dias não sofrem alterações na PFAO e na viabilidade oocitária, confirmando o sucesso da técnica na produção de um maior número de embriões por vaca.