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A inseminação artificial (IA) é uma ferramenta essencial para o melhoramento genético e oconsequente aumento da eficiência reprodutiva de rebanhos leiteiros. A utilização de sêmen sexado representa um passo ainda maior na busca de melhoria da eficiência desse tipo de produção. No presente experimento avaliou-se a eficiência de IA e Inseminação artificial em Tempo Fixo (IATF) em vacas e novilhas da raça Girolando com sêmen sexado. O experimento foi conduzido na Universidade Estadual do Mato Grosso do Sul (UEMS), localizada na cidade de Aquidauana–MS. Foram utilizados 20 animais de diferentes idades (6,3±3,76 anos), sendo divididos em doisgrupos: o grupo 1 foi submetido à inseminação artificial em tempo fixo (n=6) e o grupo 2 a inseminação artificial convencional (n=14); todos os animais foram inseminados com sêmen sexado. Os protocolos iniciaram no D0 com a inserção do dispositivo de progesterona (DIB, Intervet-Schering-Plough), no D8 foi realizada a retirada do dispositivo e a aplicação intramuscular de 0,526 mg de cloprostenol sódico (Sincrocio®, Ouro Fino), em todos os animais. Os animais submetidos ao protocolo de IATF receberam no D8 500 UI de Gonadotrofina coriônica equina –eCG (Folligon®, Intervet-Shering Plough) e no D9 1mg de benzoato de estradiol (Estrogin®,Farmavet) ambos via intramuscular e a IA foi realizada 32 horas depois. As fêmeas do grupo IA foram submetidos à observação de cio e IA 12 horas após a aceitação da monta pelo rufião. Noperíodo de 15 a 25 dias após a IA todas as fêmeas foram submetidas à observação do eventualretorno ao cio e 45 dias após a IA foi feito o diagnóstico de gestação por ultrassonografia transretal (Aquila, Pie Medical). A taxa de não retorno ao cio mostrou menor eficiência para as fêmeas de IATF (p=0,0493), no entanto a taxa de prenhez foi semelhante estatisticamente (p=0,2215),apresentando 42,85% para IA e 16,7% para IATF. A taxa de prenhez obtida à segunda inseminação mostrou-se menos eficiente para o sêmen sexado (0%) que para o sêmen não sexado (71,42%;p<0,0001). Não foi observada diferença significativa entre novilhas e vacas para taxa de prenhez, inseminadas por IA ou IATF com sêmen sexado.